Effects of Bacillus subtilis on Candida albicans: biofilm formation, filamentation and gene expression / Efeitos de Bacillus subtilis sobre Candida albicans: formação de biofilme, filamentação e expressão gênica

Objective: The aim of this study was evaluate the effect of Bacillus subtilis on Candida albicans biofilm formation and filamentation by evaluating the gene expression of ALS3, HWP1, BCR1, EFG1 and TEC1. Material and Methods: Mixed (C. albicans / B.subtilis) and monotypic biofilms were cultured in plates at 37°C for 48 h under shaking for counting viable cells (CFU / mL) and analysis of gene expression by real-time PCR. The C. albicans filamentation assay was performed in medium containing 10% fetal bovine serum at 37°C for 6 hours. Data was analysed by t-Student and Mann­ Whitney tests. Results: B. subtilis reduced the biofilm formation of C. albicans in 1 log when cultured in the same environment (p<0.0001). In addition, it significantly reduced the yeast - hypha transition affecting the morphology of C. albicans. Among all of the analyzed genes, the ALS3 and HWP1 genes were the most affected, achieving 111.1- and 333.3- fold decreases in the C. albicans biofilms associated with B. subtilis, respectively. Conclusion: B. subtilis reduced the biofilm formation and filamentation of C. albicans by negatively regulating the ALS3, HWP1, BCR1, EFG1 and TEC1 genes that are essential for the production of biofilm and hyphae. (AU)

Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de Bacillus subtilis sobre a formação de biofilme e filamentação de Candida albicans através da avaliação da expressão dos genes ALS3, HWP1, BCR1, EFG1 and TEC1. Material e métodos: Biofilmes monotípicos e mistos (C. albicans / B.subtilis) foram cultivados em placas a 37°C por 48 h sob agitação, para a contagem de células viáveis (UFC/mL) e para a análise da expressão gênica por PCR em tempo real. O ensaio de filamentação de C. albicans foi realizado em meio contendo 10% de soro fetal bovino a 37°C por 6 h. Os dados obtidos foram analisados por testes t-Student e Mann­Whitney. Resultados: B.subtilis reduziu em 1 log a formação de biofilme por C. albicans quando cultivados no mesmo ambiente (p<0.0001). Além disso, reduziu significantemente a transição de levedura para hifa, afetando assim, a morfologia de C. albicans. Em relação aos genes analisados, os genes ALS3 e HWP1 foram os mais regulados negativamente, com uma diminuição de 111,1 e 333,3 vezes, respectivamente, na sua expressão em biofilmes de C. albicans associados a B. subtilis. Conclusão: B. subtilis reduziu a filamentação e a formação de biofilme de C. albicans através da regulação negativa dos genes ALS3, HWP1, BCR1, EFG1 e TEC1, que são essenciais na produção de hifas e de biofilme. (AU)

Evaluation of the maladaptation of the test base in acrylic resin regarding the technique of preparation, place of measurement and storage time / Avaliação da desadaptação da base de prova em resina acrílica em relação à técnica de confecção, local de mensuração e tempo de armazenagem

Introduction: The most used material for the preparation of the baseplates is the acrylic resin, but it can present distortions. Objective: To evaluate preparation technique, region and storage time that presents less maladaptation of the base when made with self-cured acrylic resin. Material and method: Models were created in gypsum type III simulating edentulous maxilla, as divided into 3 groups (n = 10): GC (control group) thermopolymerizable acrylic resin; G1 - manual adaptation technique and G2 - drip technique. For the measurements, silicone by condensation of light consistency that was interposed between base and model was used. With a hydraulic press, 50 kg pressure was applied leading the base of the model. The obtained mold was measured in the palate, canine and molar regions with a digital caliper at the following times: immediately after the base polymerization, at 24, 48, 72, 96 hours and one week. The results were submitted to statistical analysis. Result: G1 presented maladaptation of 0.43 mm ± 0.10, while G2 obtained 0.39 mm ± 0.11. The lowest maladaptation occurred in the CG. The palate region presented greater maladaptation (0.52 ± 0.07) and the canine region, the lowest (CD = 0.27 mm ± 0.07 and CE = 0.27 ± 0.09); There was no statistically significant difference for storage times. Conclusion: G2 presented lower values than G1, with no statistically significant difference. The palate region presented greater maladaptation, followed by molars and canines. The bases continued to maladaptation the model after the immediate polymerization, with no statistically significant difference.

Introdução: O material mais empregado para confecção da base de prova é a resina acrílica por oferecer maior rapidez e praticidade, embora tenda a maior distorção. Objetivo: Avaliar técnica de confecção, região e tempo de armazenagem que apresente menor desadaptação da base de prova confeccionada com resina acrílica ativada quimicamente. Material e método: Confeccionaram-se modelos em gesso tipo III simulando maxila edêntula que foram divididos em 3 grupos (n = 10): GC - (grupo controle) resina acrílica termopolimerizável; G1 - técnica da adaptação manual; e G2 - técnica do gotejamento. Para as mensurações utilizou-se silicone por condensação de consistência leve que foi interposto entre base e modelo. Com uma prensa hidráulica aplicou-se pressão de 50 kg levando a base de encontro ao modelo. O molde obtido foi mensurado nas regiões de palato, caninos e molares com paquímetro digital nos seguintes tempos: imediatamente após a polimerização da base, em 24, 48, 72, 96 horas e uma semana. Os resultados foram submetidos à análise estatística. Resultado: O G1 apresentou média de desadaptação de 0,43mm±0,10, enquanto o G2 obteve 0,39 mm ± 0,11. Os menores valores de desadaptação ocorreram no GC; A região do palato apresentou maior desadaptação (0,52 mm ± 0,07) e a região de caninos, as menores (CD = 0,27 mm ± 0,07 e CE = 0,27 ± 0,09); Não houve diferença estatisticamente significante para os tempos de armazenagem. Conclusão: O G2 apresentou menores valores que o G1, sem diferença estatisticamente significante; A região de palato apresentou maior desadaptação, seguida de molares e caninos; As bases continuaram desadaptando ao modelo após a polimerização imediata, sem diferença estatisticamente significante.

Antimicrobial and mechanical acrylic resin properties with silver particles obtained from Fusarium oxysporum / Propriedades antimicrobiana e mecânica de resina acrílica com partículas de prata obtidas a partir de Fusarium oxysporum

Objective: This study evaluated the effects of the incorporation of silver nanoparticles (AgNPs) obtained from Fusarium oxysporum on heat-activated acrylic resin (HAAR) and their influence on resin's surface roughness, hardness, color alteration and antimicrobial capacity against Candida albicans. Material and Methods: For this, 50 discs of HAAR (2x5 mm) were produced and divided into three groups, Control: HAAR; Ag1: HAAR plus 0.539 mg of AgNPs; and Ag2: HAAR plus 1.1 mg of AgNPs. Knopp hardness (HK), surface roughness (Ra and Rz) and color alteration according to the CIE Lab were measured. Specimens were then evaluated in vitro with regard to C. albicans biofilm formation through formed colony count (CFU/mL). Scanning Electron Microscopy (SEM) and Atomic force microscopy (AFM) analyses were performed. Results: The addition of AgNPs of both concentrations changed Ra, Rz and HK significantly. There was statistically significant difference for L (p=0.00); a*(p=0.00) and b*(p=0.00) parameters. There were no differences between Ag1 and Ag2 biofilm formation, but the comparison of both with the control group presented a significant reduction (p=0.0091) on biofilm formation. SEM and AFM images showed no signs of NPs clustering. Conclusion: It can be concluded tha AgNPs incorporation in HAAR was effective in reducing C. albicans activity, with a slight change in color and hardness of the material, being effective therefore, in regions such as the dental prostheses palate, which have lesser aesthetic appeal. (AU)

Objetivo: Este estudo avaliou os efeitos da incorporação de nanopartículas de prata (AgNPs) obtidas a partir de Fusarium oxysporum em resina acrílica ativada termicamente (RAAT) e sua influência na rugosidade, dureza, cor e capacidade antimicrobiana contra Candida albicans. Material e Métodos: Para isso, 50 discos de RAAT (2x5 mm) foram produzidos e divididos em três grupos, Controle: RAAT; Ag1: RAAT com 0,539 mg de AgNPs; e Ag2: RAAT com 1,1 mg de AgNPs. Foram medidas a dureza Knopp (DK), a rugosidade superficial (Ra e Rz) e a alteração da cor de acordo com o sistema CIE Lab. As amostras foram então avaliadas in vitro em relação à formação de biofilme de C. albicans através da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC / mL). Foram realizadas análises de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e Microscopia de Força Atômica (AFM). Resultados: A adição de AgNPs de ambas as concentrações alterou significativamente Ra. Rz e DK. Houve diferença estatisticamente significativa para os parâmetros L (p = 0,00); a * (p = 0,00) e b * (p = 0,00). Não houve diferenças entre a formação de biofilme Ag1 e Ag2, mas a comparação entre ambos com o grupo controle apresentou redução significativa (p = 0,0091) na formação de biofilmes. As imagens de MEV e AFM não mostraram sinais de agrupamento de NPs. Conclusão: Pode-se concluir que a incorporação de AgNP no RAAT foi eficaz na redução da atividade de C. albicans, com uma discreta alteração na cor e dureza do material, sendo efetiva, portanto, em regiões linguais de próteses dentárias, que possuem menor apelo estético. (AU)

Study of Microbial Interaction Formed by "Candida krusei" and "Candida glabrata": "In Vitro" and "In Vivo" Studies

Abstract Recently, the non-albicans Candida species have become recognized as an important source of infection and oral colonization by association of different species in a large number of immunosuppressed patients. The objective of this study was to evaluate the interactions between C. krusei and C. glabrata in biofilms formed in vitro and their ability to colonize the oral cavity of mouse model. Monospecies and mixed biofilms were developed of each strain, on 96-well microtiter plates for 48 h. These biofilms were analyzed by counting colony-forming units (CFU/mL) and by determining cell viability, using the XTT hydroxide colorimetric assay. For the in vivo study, twenty-four mice received topical applications of monospecie or mixed suspensions of each strain. After 48 h, yeasts were recovered from the mice and quantified by CFU/mL count. In the biofilm assays, the results for the CFU/mL count and the XTT assay showed that the two species studied were capable of forming high levels of in vitro monospecie biofilm. In mixed biofilm, the CFU of C. krusei increased (p=0.0001) and C. glabrata decreased (p=0.0001). The metabolic activity observed in XTT assay of mixed biofilm was significantly reduced compared with a single C. glabrata biofilm (p=0.0001). Agreeing with CFU in vitro count, C. glabrata CFU/mL values recovered from oral cavity of mice were statistically higher in the group with single infection (p=0.0001) than the group with mixed infection. We concluded that C. krusei inhibits C. glabrata and takes advantage to colonize the oral cavity and to form biofilms.

Resumo Recentemente, as espécies não albicans tem se tornado uma importante fonte de infecção e de colonização oral pela associação de espécies em um grande número de pacientes imunossuprimidos. O objetivo desse estudo foi avaliar a interação entre C. krusei e C. glabrata em biofilmes formados in vitro e sua capacidade em colonizar a cavidade oral em modelo de camundongo. Biofilmes monoespécies e mistos foram formados em placas de 96 poços por 48 h. Esses biofilmes foram analisados pela contagem de UFC/mL e pela determinação da viabilidade celular, usando ensaio de XTT. Para o estudo in vivo, vinte e quatro camundongos receberam aplicações tópicas de suspensões monoespécies e mistas de cada espécie. Após 48 h, as leveduras foram recuperadas dos camundongos e quantificadas por UFC/mL. Nos ensaios de biofilme, os resultados da contagem de UFC/mL e do ensaio de XTT mostraram que as duas espécies estudadas foram capazes de formar grande quantidade de biofilme monoespécie in vitro. Nos biofilmes mistos, a UFC/mL de C. krusei aumentou (p=0,0001) e de C. glabrata diminuiu (p=0,0001). A atividade metabólica observada no ensaio de XTT nos biofilmes mistos foi significantemente reduzida comparada com o biofilme formado apenas de C. glabrata (p=0,0001). Concordado com as contagens in vitro, os valores de UFC/mL de C. glabrata recuperados da cavidade oral dos camundongos foram estatisticamente maior no grupo com infecção simples (p=0,0001) do que do grupo com infecção mista. Nós concluímos que C. krusei inibe C. glabrata e possui vantagem em colonizar a cavidade oral e formar biofilmes.

In vitro reduction of pathogenic sporothrix schenckii fungus by photodynamic therapy / Terapia fotodinâmica na redução in vitro do fungo patogênico sporothrix schenckii

Sporotrichosis is a disease that affects the lymph vessels, skin and some internal organs. Most cases are presented as asubacute chronic mycosis caused by the Sporothrix schenckii fungus; fairly common in tropical regions. The aim of thisstudy was to evaluate the susceptibility of Sporothrix schenckii yeast cells to the effects of photodynamic inactivation.For this, the viable cells were separated into four groups: irradiated with photosensitizer group (L+F+); irradiated withoutphotosensitizer group (L+F-), without irradiation and with photosensitizer group (L-F+); and without irradiation andwithout photosensitizer group (L-F-). The methylene blue photosensitizer concentration used was 0.1 mg/mL, and theAluminum Gallium Arsenide laser dose was 26.3 J/cm2. Then, counting of colony forming units (CFUs) was performedin each group. The main result was that the irradiated group with photosensitizer (L+F+) was the one that showed nogrowth of CFUs. Thus, it was concluded that Sporothrix schenckii can be inactivated by use of photodynamic therapy

A esporotricose é uma doença que afeta os vasos linfáticos, pele e alguns órgãos internos. A maioria dos casos seapresenta como uma micose subaguda à crônica, provocada por fungos do complexo Sporothrix schenckii, bastantecomuns em regiões tropicais. O objetivo deste estudo foi avaliar a suscetibilidade aos efeitos da inativação fotodinâmicaem células leveduriformes de fungos do complexo Sporothrix schenckii. Para tal, as células viáveis foram separadas emquatro grupos, sendo estes: grupo irradiado com fotossensibilizador (L+F+); grupo irradiado sem fotossensilizador (L+F-),grupo não irradiado com fotossensibilizador (L-F+); e grupo não irradiado sem fotossensibilizador (L-F-). A concentraçãodo fotossensibilizador azul de metileno utilizada foi de 0,1 mg/mL, e a dosagem do laser de Arseneto de Gálio Alumíniofoi de 26,3 J/cm2. Em seguida, foi realizada a contagem das unidades formadoras de colônias (UFCs) em cada grupo.Como principal resultado, verificou-se que o grupo irradiado com fotossensibilizador (L+F+) foi o único que nãoapresentou crescimento de UFCs. Dessa forma, concluiu-se que fungos do complexo Sporothrix schenckii podem serinativados com o uso da terapia fotodinâmica

Isolamento e caraterização de Lactobacillus spp. da cavidade bucal e sua ação probiótica sob Candida albicans: formação de biofilme, infecção em modelos de invertebrados e expressão dos genes EFG1, HWP1 e ALS1 / Isolation and characterization of Lactobacillus spp. from oral cavity and their probiotic action in Candida albicans: biofilm formation, infection in invertebrate models and EFG1, HWP1 and ALS1 gene expression

O estudo da atividade inibitória de Lactobacillus pode contribuir na descoberta de novas estratégias terapêuticas nas infecções por Candida. Nesse contexto, o objetivo desse estudo foi isolar e identificar Lactobacillus da cavidade bucal de indivíduos livres de cárie e avaliar seu potencial de inibição de C. albicans por meio de estudos in vitro e in vivo. Primeiramente, foram avaliados os efeitos de 30 isolados clínicos de Lactobacillus sobre o número de células viáveis (UFC) em biofilme de C. albicans e sobre a formação de hifas. Os isolados que obtiveram os maiores efeitos inibitórios sobre C. albicans foram selecionados para os testes de determinação da biomassa total dos biofilmes pela absorbância do cristal violeta, análise da arquitetura dos biofilmes por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e quantificação da expressão de genes de C. albicans (ALS3, HWP1, EFG1 e CPH1) por qPCR. Esses isolados também foram submetidos a estudos in vivo usando os modelos de Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans. Para o estudo em G. mellonella, a infecção experimental foi avaliada pela curva de sobrevivência, quantificação da carga fúngica na hemolinfa, densidade hemocitária, quantificação da expressão gênica de peptídeos antifúngicos (Gallerymicina e Galiomicina) e monitoramento da infecção de C. albicans por análise de bioluminescência. No modelo de C. elegans, a infecção foi avaliada por meio dos ensaios de curva de sobrevivência e estudo da filamentação de C. albicans. Os resultados dos ensaios in vitro demonstraram que L. paracasei 28.4, L. rhamnosus 5.2 e L. fermentum 20.4 foram as cepas com maior atividade antimicrobiana sobre os biofilmes de C. albicans. Nessas cepas, todos os genes analisados foram regulados negativamente na associação com Lactobacillus quando comparados com o grupo controle. No estudo in vivo, a injeção de L. paracasei 28.4 em G. mellonella infectadas com C. albicans aumentou a sobrevida das larvas, o número de hemócitos e a expressão de peptídeos antifúngicos, reduzindo assim a UFC de C. albicans. Em C. elegans, L. paracasei 28.4 também foi capaz de aumentar a sobrevida dos vermes infectados com C. albicans e reduzir a filamentação. Conclui-se que L. fermentum 20.4, L. paracasei 28.4 e L. rhamnosus 5.2 tem potencial para serem usados como probióticos na cavidade bucal devido sua ação anti-biofilme e sua regulação negativa dos genes de virulência de C. albicans. L. paracasei 28.4 foi capaz de prolongar a sobrevida nos dois modelos experimentais infectados com C. albicans por apresentarem ação antifúngica e imunomodulatória(AU)

The study of the antifungal activity of Lactobacillus may contribute to the discovery of new therapeutic strategies for Candida infections. In this context, the objective of this study was to isolate and identify Lactobacillus from the oral cavity of caries-free subjects and to evaluate its effects through in vitro and in vivo studies. First, the effects of 30 clinical isolates of Lactobacillus on the number of viable cells (CFU) in biofilms of C. albicans and on hyphae formation were evaluated. The isolates that obtained the highest inhibitory effects on C. albicans were selected for biofilm biomass determination by violet crystal absorbance, analysis of biofilm architecture by scanning electron microscopy (SEM) and quantification of the expression of C. albicans (ALS3, HWP1, EFG1 and CPH1) by real time PCR. These isolates were also submitted to in vivo studies using the Galleria mellonella and Caenorhabditis elegans models. For the study in the model of Galleria mellonella, the experimental infection was evaluated by the survival curve, quantification of the fungal load in the hemolymph, hemocitary density, the gene expression of antifungal peptides (Gallerymicin and Galiomicin) and monitoring of C. albicans infection by bioluminescence analysis. In the Caenorhabditis elegans model, the infection was evaluated by the survival curve assays and the study of C. albicans filamentation. The results of in vitro tests demonstrated that L. paracasei 28.4, L. rhamnosus 5.2 and L. fermentum 20.4 were the strains with the highest antimicrobial activity on the biofilms of C. albicans. In these strains, all analyzed genes were negatively regulated in association with Lactobacillus when compared to the control group. In the in vivo study, the injection of L. paracasei 28.4 into the G. mellonella increased survival of the larvae, the number of hemocytes and the expression of antifungal peptides, thus reducing the CFU of C. albicans. In C. elegans, L. paracasei 28.4 was also able to increase the survival of worms infected with C. albicans and reduce the filamentation. We conclude that L. fermentum 20.4, L. paracasei 28.4 and L. rhamnosus 5.2 have potential to be used as probiotics in the oral cavity due to their anti-biofilm action and their negative regulation of virulence genes of C. albicans. L. paracasei 28.4 was able to prolong survival of both experimental models infected with C. albicans for having antifungal and immunomodulatory action(AU)

Different Extracts of Zingiber officinale Decrease Enterococcus faecalis Infection in Galleria mellonella

Dried, fresh and glycolic extracts of Zingiber officinale were obtained to evaluate the action against G. mellonella survival assay against Enterococcus faecalis infection. Eighty larvae were divided into: 1) E. faecalis suspension (control); 2) E. faecalis + fresh extract of Z. officinale (FEO); 3) E. faecalis + dried extract of Z. officinale (DEO); 4) E. faecalis + glycolic extract of Z. officinale (GEO); 5) Phosphate buffered saline (PBS). For control group, a 5 μL inoculum of standardized suspension (107 cells/mL) of E. faecalis (ATCC 29212) was injected into the last left proleg of each larva. For the treatment groups, after E. faecalis inoculation, the extracts were also injected, but into the last right proleg. The larvae were stored at 37 °C and the number of dead larvae was recorded daily for 168 h (7 days) to analyze the survival curve. The larvae were considered dead when they did not show any movement after touching. E. faecalis infection led to the death of 85% of the larvae after 168 h. Notwithstanding, in treatment groups with association of extracts, there was an increase in the survival rates of 50% (GEO), 61% (FEO) and 66% (DEO) of the larvae. In all treatment groups, the larvae exhibited a survival increase with statistically significant difference in relation to control group (p=0.0029). There were no statistically significant differences among treatment groups with different extracts (p=0.3859). It may be concluded that the tested extracts showed antimicrobial activity against E. faecalis infection by increasing the survival of Galleria mellonella larvae.

Extratos seco, fresco e glicólico de Zingiber officinale foram obtidos para avaliar suas ações por meio de ensaio de sobrevivência em G. mellonella contra infecção por Enterococcus faecalis. Oitenta larvas foram divididas em: 1) Suspensão de E. faecalis (controle); 2) E. faecalis + extrato fresco de Z. officinale (FEO); 3) E. faecalis + extrato seco de Z. officinale (DEO); 4) E. faecalis + extrato glicólico de Z. officinale (GEO); 5) Solução tampão fosfato salina (PBS). Para o grupo de controle, 5 µL de inóculo de suspensão padronizada (107 células/mL) de E. faecalis (ATCC 29212) foi injetado na última proleg esquerda de cada lagarta. Para os grupos com tratamento, após a injeção de E. faecalis, os extratos foram injetados na última proleg direita. Após as injeções, as lagartas foram armazenadas a 37 °C e o número de animais mortos foi registrado diariamente em 168 h (7 dias) para analisar a curva de sobrevivência. As lagartas foram consideradas mortas quando elas não mostraram qualquer movimento após o toque. A infecção por E. faecalis levou à morte de 85% das lagartas após 168 h. Não obstante, nos grupos de tratamento com associação dos extratos, houve um aumento nas taxas de sobrevivência de 50% (GEO), 61% (FEO) e 66% (DEO) das lagartas. Em todos os grupos com tratamento, as lagartas apresentaram um aumento na sobrevivência, com diferença estatisticamente significativa em relação ao grupo controle (p=0,0029). Não houve diferença estatisticamente significativa entre os tratamentos com os diferentes extratos (p=0,3859). Pode concluir-se que os extratos testados mostraram atividade antimicrobiana contra a infecção por E. faecalis, aumentando a sobrevivência das lagartas de G. mellonella.

Comparison of the hemolytic activity between C. albicans and non-albicans Candida species

The ability to produce enzymes, such as hemolysins, is an important virulence factor for the genus Candida.The objective of this study was to compare the hemolytic activity between C. albicansand non-albicans Candida species. Fifty strains of Candida species, isolated from the oral cavity of patients infected with HIV were studied. The isolates included the following species: C. albicans, C. dubliniensis, C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei, C. parapsilosis, C. dubliniensis, C. norvegensis, C. lusitaniae, and C. guilliermondii. Hemolysin production was evaluated on Sabouraud dextrose agar containing chloramphenicol, blood, and glucose. A loop-full of pure Candidaculture was spot-inoculated onto plates and incubated at 37ºC for 24 h in a 5% CO2 atmosphere. Hemolytic activity was defined as the formation of a translucent halo around the colonies. All C. albicansstrains that were studied produced hemolysins. Among the non-albicans Candidaspecies, 86% exhibited hemolytic activity. Only C. guilliermondiiand some C. parapsilosis isolates were negative for this enzyme. In conclusion, most non-albicans Candidaspecies had a similar ability to produce hemolysins when compared to C. albicans.

Correlation of phospholipase and proteinase production of Candida with in vivo pathogenicity in Galleria mellonella

An essential factor to the virulence of the genus Candida is the ability to produce enzymes and this may be crucial in the establishment of fungal infections. AIM:This study investigated in vitro enzymatic activities of Candida species and their virulence in an in vivo Galleria mellonella experimental model. METHODS: Twenty-four clinical strains of Candida spp. isolated from the human oral cavity were evaluated, including the following species: C. albicans, C. dubliniensis, C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei, C. parapsilosis, C. norvegensis, C. lusitaniae and C. guilliermondii. All Candida strains were tested in vitro for production of proteinase and phospholipase. The Candida strains were also injected into Galleria mellonella larvae to induce experimental candidiasis, and after 24 hours, the survival rate was assessed. RESULTS: Phospholipase and proteinase activity were observed in 100% of the C. albicans strains. In the non-albicans species, proteinase and phospholipase activity were observed in 25 and 43% of the studied strains, respectively. The most pathogenic Candida species in G. mellonella were C. albicans, C. dubliniensis and C. lusitaniae, whereas C. glabrata was the least virulent species. Furthermore, a positive significant correlation was found between both enzymatic activities with virulence in G. mellonella. CONCLUSIONS: The virulence of Candida strains in G. mellonella is related to the quantity of proteinases and phospholipases production of each strain.

Efeitos clínicos e radiográficos do laser em baixa intensidade após a extração de terceiros molares inclusos / Clinical and radiographic effects of low intensity laser after extraction of unerupted third molars

Introdução: O laser em baixa intensidade tem sido indicado como tratamento coadjuvante no pós-operatório da cirurgia de extração dentária. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos clínicos e radiográficos do laser em baixa intensidade na cirurgia de exodontia de terceiros molares inclusos. Material e método: Oito pacientes foram submetidos à extração dos terceiros molares inferiores inclusos. O dente esquerdo foi tratado com laser durante a cirurgia e por mais dois dias do pós-operatório (Grupo Laser). A cirurgia do dente direito foi realizada após 15 dias da cirurgia do dente esquerdo e não recebeu laserterapia (Grupo Controle). A avaliação clínica do pós-operatório foi baseada na medida do edema e na análise de questionário para avaliação da dor. Após 40 dias de cada cirurgia, foram feitas radiografias periapicais digitais para medida das densidades ópticas da reparação óssea, por meio do programa Image J. Os dados obtidos na medida do edema e na análise de densidade óptica foram submetidos ao teste estatístico t de Student. Resultado: O nível de dor dos pacientes no pós-operatório foi menor no Grupo Laser em relação ao Grupo Controle. Entretanto, na medida do edema e na análise de densidade óptica das radiografias, não houve diferença estaticamente significante do Grupo Laser em relação ao Grupo Controle. Conclusão: De acordo com os parâmetros utilizados neste estudo, concluiu-se que a aplicação do laser em baixa intensidade promoveu analgesia no pós-operatório, porém não teve efeito sobre o edema e a reparação óssea.

Introduction: The low intensity laser therapy (LLLT) has been indicated as coadjuvant treatment of postoperative dental extraction surgery. Objective: The aim of this study was to evaluate the clinical and radiological findings of LLLT in the surgery for extraction of unerupted third molars. Material and method: Eight patients were submitted to extraction of mandibular third molar. The left tooth was treated with laser during surgery and for another 2 days after surgery (Laser Group). The right tooth surgery was performed after 15 days and did not receive laser therapy (control group). Clinical evaluation of the postoperative period was based on the measuring of edema and analysis of a questionnaire to assess pain. After 40 days of each surgery, digital periapical radiographs were made and measured the optical density of bone repair were analyzed using the Image J. The data obtained in the measurement of edema and analysis of optical density were tested using Student t test. Result: The level of pain in postoperative patients was lower in the laser group compared to the control group. However, in the measurement of edema and analysis of optical density of radiographs there was no statistically significant difference in the laser group compared to control. Conclusion: According to the parameters used in this study, we can concluded that the application of LLLT promoted analgesia postoperatively, but did not show effects on edema and bone repair.

Interação entre Escherichia coli e Candida albicans em biofilmes formados in vitro: análise da viabilidade celular por método colorimétrico / Interaction between Escherichia coli and Candida albicans in biofilms formed in vitro: analysis of cell viability by the colorimetric assay

As interações entre fungos e bactérias estão presentes na natureza e têm grande relevância médica e ambiental. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos de Escherichia coli sobre os biofilmes de Candida albicans formados in vitro. Foram desenvolvidos biofilmes heterotípicos com a associação de C. albicans e E. coli e biofilmes monotípicos deC. albicans (grupo controle). Foi utilizada uma suspensão padronizada de C. albicans contendo 107 células.mL?1 para formação dos biofilmes. Para analisar os efeitos de E. coli no biofilme de C. albicans, foram testadas diferentes densidades celulares da suspensão de E. coli (107, 106 e 105 células.mL?1). Após 90 minutos e 24 horas da formação do biofilme, a viabilidade celular de C. albicans foi quantificada utilizando-se o ensaio colorimétrico XTT (2 metoxi 4 nitro 5 sulfofenil 5 fenilalanina carbonil 2H tetrazolium hidróxido). Os dados foram submetidos à Análise deVariância ANOVA e ao teste de Tukey, com significância de 5% (p < 0,05). Após 90 minutos da formação do biofilme, observou-se que a viabilidade celular de C. albicans dos biofilmes heterotípicos foi semelhante ao monotípico. A análise de 24 horas demonstrou que a viabilidade celular de C. albicans foi maior no biofilme monotípico emrelação aos biofilmes heterotípicos; entretanto, essa diferença não foi estatisticamente significante. Além disso, não foram observadas diferenças estatísticas entre as densidades celulares de E. coli testadas nos biofilmes heterotípicos. Conclui-se que, dentro dos parâmetros utilizados, E. coli não inibiu a formação de biofilme por C. albicans.

The interactions between fungi and bacteria are present in nature and has medical and environmental importance. The aim of this study was to evaluate the effects of interaction between ATCC strains Candida albicans and Escherichia coli through the study of biofilms in vitro. For this study were developed biofilms formed by the association between C.albicans and E.coli and monotypic biofilms of C. albicans (control group). To evaluate the effects of E. coli in biofilms of C. albicans, we tested different cell densities of E.coli suspension (107, 106 and 105 cells.mL?1). After 90 minutes and 24 hours of biofilm formation, cell viability of C. albicans was quantified using the XTT (2 methoxy 4 nitro 5 sulfophenyl 5 phenylamino carbonyl 2H tetrazolium hydroxide) colorimetric assay. Data were submitted to ANOVA and Tukey?s test, with 5% of significance. After 90 minutes of Candidal biofilm formation, we observedthat cell viability of C. albicans heterotypic biofilms was similar to monotypic biofilm (control group). For the analysis of 24 hours, it was found that cell viability of C. albicans was higher in the monotypic biofilm if compared to heterotypic biofilm, however this difference was not statistically significant. In addition, there were no statisticaldifferences between E. coli different cell densities tested in heterotypic biofilms. According to the methods used, we can conclude that E. coli did not inhibit the biofilm formation by C. albicans.

Photoinactivation of escherichia coli using xanthene dyes andlight-emitting diodes / Fotoinativação de escherichia coli utilizando corantes xantenos e diodo emissor de luz

The development of antibiotic resistance by pathogenic bacteria is currently one of the major problems in medicine. There fore, the study of new treatment modalities such as photodynamic therapy is important. The aim was to evaluate the effects of the Rose Bengal and erythrosine dye combined with a light-emitting diode (LED) on Escherichia coli. An E. coli suspension was prepared from a clinical strain and subjected to the following treatments: LED and Rose Bengal, LED and erythrosin, LED and physiological solution, and physiological solution only as control, and exposure to light for 60, 120 and 180 seconds. After incubation at 37°C for 24 h, the number of colony-forming units (CFU) was calculated and submitted to analysis of variance (ANOVA). Photodynamic therapy using Rose Bengal resulted in a reduction of 5.58 log10 in the number of CFU/mL after light exposure for 60 s and complete elimination after 180 s. However, photodynamic therapy using erythrosin only caused a slight reduction in the number of CFU/ml (0.30 log10)compared to the control group. The use of the LED alone had no toxic effect on the strain tested. In conclusion, Rose Bengal was more effective than erythrosin in photodynamic therapy against E. coli.

O desenvolvimento de resistência aos antibióticos por bactérias patogênicas é um dos maiores problemas da medicina atual. Assim, torna-se importante o estudo de novas modalidades de tratamento, como a terapia fotodinâmica. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos dos fotos sensibilizadores rosa bengal e eritrosina associados a um diodo emissor de luz (LED) sobre Escherichia coli. Foi preparada uma suspensão padronizada de E. coli (106 células/mL) a partir de uma cepa clínica isolada da cavidade bucal humana. Essa cepa foi submetida aos seguintes tratamentos: laser e rosa bengal (L+RB+), laser e eritrosina (L+E+), laser e solução fisiológica (L+F-) e apenas solução fisiológica como controle (LF-) nos tempos de 60, 120 e 180 segundos de exposição à luz. Foi utilizado LED emissor de luz azul (460 nm), rosabengal e eritrosina na concentração de 50 μM. A seguir, foram realizadas culturas em ágar Infuso Cérebro-Coração para a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) e os dados submetidos à análise de variância. A terapia fotodinâmica utilizando rosa bengal foi capaz de reduzir o número de UFC/mL de 5,58 log10 no tempo de exposição do LED de 60 seg até eliminação completa do microrganismo no tempo de 180 seg. Entretanto, a terapia fotodinâmica com eritrosina apresentou discreta redução do número de UFC/mL (0,30 log10) quando comparada ao grupo controle.O uso isolado do LED não apresentou toxicidade para as cepas testadas. Concluiu-se que o Rosa Bengal foi mais eficaz do que a eritrosina como fotossensibilizador na terapia fotodinâmica sobre Escherichia coli.